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文库的构建是将基因片段装载到一个载体中（质粒载体、噬菌体载体或者人工染色体），然后转化大肠杆菌、酵母或者噬菌体来构建的，而不是单单拿cdna或者dna片段（鸟枪法）来构建的。
因此，你说的启动子、终止子和标记实际上就是相应的载体上的。构成文库的实际是载有很多目的片段的载体，而不单单是目的基因。因为cdna是由成熟mrna逆转录而成的。成熟mrna是由基因组dna转录并加工而成的，dna转录的时候是不会把启动子也转录的，转录起始位点都在启动子下游。至于没有内含子，是因为（真核）mrna成熟的过程中剪接体（也就是一系列核内小分子核糖核蛋白
基因工程的基本过程主要包括哪些?
DNA文库，也被称为基因文库，是指某生物基因组中所有可表达的基因片段，经mRNA反转录后获得相应的cDNA的集合。
一、DNA文库的作用
在基因研究方面，DNA文库可以包含一个生物所有的可表达基因片段，因此可随时筛选出需要的目的基因片段，无需再通过PCR制备，可以节省时间和成本，提高效率。在基因功能研究方面，通过建立特定生物的cDNA文库，可以研究基因的功能以及寻找特定基因的克隆。
二、DNA文库的建立方式
DNA文库的建立过程类似于建立图书馆的过程。在建立图书馆时，需要收集大量的书籍，对这些书籍进行分类、编目和标记，以方便读者查找和使用。
同样，在建立DNA文库时，需要收集大量的基因序列样本，对这些样本进行分类、编目和标记，以方便科研人员查找和使用。具体步骤包括：
建立DNA文库时的注意事项：
一、确保基因序列样本的充足和多样性
为了建立一个全面而准确的DNA文库，需要收集足够数量和多样性的基因序列样本。这样可以确保文库中包含所有可能的基因类型和变异体，从而能够尽可能地覆盖生物体的基因组。
二、准确分类和标记
对每个基因序列样本进行准确的分类和标记是非常重要的。这包括确定样本的来源、基因类型、功能等重要信息。这些信息将有助于后续的研究和使用，并确保文库的可追溯性和可重复性。
三、确保文库的稳定性和可扩展性
为了使DNA文库能够长期稳定保存并方便后续的研究和使用，需要确保文库的稳定性和可扩展性。这可以通过使用适当的载体和宿主细胞、优化文库的构建和筛选方法以及定期备份文库等方式来实现。
同时，对于需要长期保存的文库，还需要考虑如何降低基因序列样本的损失和降解等问题。
基因工程的基本过程主要包括以下几个步骤：
(1)目的基因的获得
目前获得目的基因的主要方式有：化学合成法和构建基因文库法。
① 化学合成法
该方法适用于已知核苷酸序列且相对分子质量较小的目的基因的制备。目前化学合成寡聚核苷酸片段的能力一般局限于150~200bp, 而绝大多基因的大小超过了这个范围，因此，需要将寡核苷酸片段适当连接并组装成完整的基因。目前成熟的全基因合成方法可以合成10~50kb长度的DNA片段。
② 构建基因文库法
基因文库(gene library) 是指含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克降群体。通过构建基因文库可以储藏和扩增某一生物的基因组片段，同时可以在需要的时候从库中调出所需的目的基因。
(2)目的基因与载体结合
基因工程的核心是将目的基因用DNA连接酶在体外连接到合适的载体DNA.上,形成重组DNA。根据目的基因片段末端的性质，以及质粒载体与外源DNA上限制酶切位点的性质，可采用黏端连接法或平端连接法。
①黏端连接法
一般选用对载体DNA只具有唯一切割位点的限制酶将载体DNA水解成具有黏端的线性DNA分子，然后再将目的DNA也做同样的限制酶水解，之后将两种纯化的水解产物混合并加入DNA连接酶，给予合适的条件，两者即能连接形成重组DNA
③ 平端连接法
如果参与重组的DNA两端是平端可以用T4噬菌体连接酶进行连接,但连接效率较低;如果参与重组的DNA一端是平端，一个是黏端，或者两个黏端不匹配，就需要用S1核酸酶将DNA的黏端修饰成平端，然后再进行连接。如果要增加连接效率，可以将平端DNA加工成具有黏端的DNA分子，再进行连接。
(3) 目的基因导入受体细胞
①转化
转化的方法是利用一定浓度的氯化钙溶液处理细菌，使带有目的基因的重组质粒进入到宿主细胞中的过程。
②转导
转导是指借助病毒、噬菌体或其他方法将外源DNA导入细胞并整合到宿主基因组上的方法。
(4)转化体的筛选与鉴定
常见的筛选方法:遗传学检测法、报道基因检测法、核酸分子杂交法、核酸序列测定法、物理检测法和免疫化学检测法等。
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